Spektrofotometer UV-Vis

Spektrofotometer menjawab jenis soalan yang berbeza daripada kebanyakan instrumen di sebelahnya. Ia tidak melaporkan sifat sampel secara langsung; ia melaporkan berapa banyak cahaya yang diserap oleh sampel pada panjang gelombang yang dipilih oleh seseorang, dan segala-galanya - kepekatan, ketulenan, sama ada sesuatu tindak balas berjalan seperti yang sepatutnya - disimpulkan daripada itu. Pilihan yang menetapkan segala-galanya di hilir oleh itu ialah panjang gelombang yang dapat dicapai oleh instrumen dan seberapa halus ia dapat memisahkannya.

Julat ini merangkumi sembilan model dalam dua siri. Siri V bekerja dalam julat tampak pada lampu tungsten; siri UV menambah lampu xenon dan mencapai sehingga 190 nm. Merentas keduanya, lebar jalur berjalan dari 5 nm hingga 1.8 nm, ketepatan panjang gelombang dari 2 nm hingga ±0.5 nm, dan semua model kecuali satu ialah berkas tunggal.

Apa yang diukur oleh instrumen

Empat kuantiti dilaporkan: transmitans, absorbans, kepekatan dan faktor kecerunan yang menghubungkan dua yang terakhir. Transmitans ialah pecahan cahaya datang yang melalui sampel. Absorbans ialah logaritma negatifnya, iaitu kuantiti yang berkadar dengan kepekatan dalam julat kerja dan yang paling banyak digunakan untuk pengukuran sebenar. Kepekatan menyusul daripada absorbans melalui faktor yang ditetapkan terhadap standard kepekatan yang diketahui, dan faktor kecerunan ialah penukaran itu yang dipegang oleh instrumen.

Oleh sebab hubungan antara absorbans dan kepekatan adalah linear hanya dalam had tertentu, julat pengukuran yang berguna lebih sempit daripada yang ditunjukkan oleh skala. Sampel yang terlalu pekat membaca seolah-olah ia cair, kerana hubungan itu berhenti menjadi linear sebelum pengesan kehabisan isyarat. Itu ialah sifat kaedah dan bukan instrumen, dan itulah sebabnya pilihan panjang laluan dan pencairan sama pentingnya dengan model yang dipilih.

Cara pengukuran berfungsi

Cahaya daripada lampu diserakkan oleh kisi holografik 1200 garis setiap milimeter dalam monokromator Czerny-Turner, yang menukar keluaran lebar itu kepada jalur sempit pada panjang gelombang yang dipilih. Berkas monokromatik itu melalui sampel, dan keamatan yang sampai ke pengesan dibandingkan dengan keamatan yang sampai melaluinya melalui rujukan. Nisbahnya ialah transmitans, dan logaritma salingannya ialah absorbans.

Tiga perkara menyusul daripada susunan itu. Yang pertama ialah sumber dan pengesan adalah sebahagian daripada pengukuran sama seperti sampelnya, dan itulah sebabnya hayat sumber dan hanyutan muncul dalam spesifikasi. Hanyutan disebut sebagai ≤0.003 A pada setiap model, dan itulah angka yang menentukan sama ada perbezaan absorbans yang kecil boleh dipercayai sepanjang larian yang panjang. Yang kedua ialah monokromator menetapkan resolusi: kisinya sama bagi seluruh julat, tetapi lebar celah di belakangnya, yang disebut sebagai lebar jalur spektrum, tidak sama, dan lebar jalur itulah dan bukan kisinya yang menentukan sama ada dua puncak yang berdekatan kekal terpisah. Yang ketiga ialah rujukan itu penting. Setiap pengukuran ialah nisbah, jadi apa-apa yang berubah antara bacaan rujukan dan bacaan sampel masuk ke dalam keputusan melainkan optik mengukur keduanya pada masa yang sama atau instrumen disifarkan semula dengan cukup kerap.

Memilih antara siri tampak dan ultraviolet

Siri tampak mencapai 320-1100 nm, kecuali pada LC-V1200E dengan julat 350-1050 nm. Siri ultraviolet mencapai 190-1100 nm pada setiap model, dan julat tambahan itu datang daripada lampu xenon di samping lampu tungsten. Tiada apa-apa lagi dalam spesifikasi yang menentukan perkara ini: kaedah yang ditulis di bawah kira-kira 320 nm tidak boleh dijalankan pada instrumen tampak, kerana tiada cahaya di situ untuk diserap, dan kaedah yang ditulis di atas panjang gelombang itu tidak memerlukan siri ultraviolet melainkan sesuatu yang lain dalam makmal yang sama memerlukannya.

Apabila kedua-dua julat diperlukan daripada satu instrumen, siri UV meliputi julat tampak dalam kotak yang sama, jadi tiada sebab untuk membeli siri tampak juga. Apabila kerja itu sepenuhnya dalam julat tampak dan makmal tidak berniat untuk bergerak di bawah 320 nm, model tampak mencapai panjang gelombang yang sama dengan kisi yang sama pada kos spesifikasi yang lebih rendah.

Lebar jalur, dan sebabnya ia menentukan sama ada dua puncak terpisah

Lebar jalur spektrum ialah lebar jalur panjang gelombang yang sebenarnya dilalui oleh instrumen pada mana-mana satu tetapan, dan di sini ia berjalan dari 5 nm hingga 1.8 nm. Lebar jalur yang lebar bukan sekadar bacaan yang lebih kasar: ia memuratakan segala-galanya di dalam tetingkap 5 nm itu, jadi dua puncak serapan yang terletak dalam beberapa nanometer antara satu sama lain dilaporkan sebagai satu bahu yang lebar, dan tiada penjagaan di tempat lain dapat memulihkannya. Lebar jalur yang cukup sempit berbanding puncak yang diukur ialah keperluannya, dan apabila sesuatu kaedah menyatakan lebar puncak, lebar jalur boleh dipilih terhadapnya secara langsung.

Itulah sebabnya julat ini merangkumi faktor hampir tiga dalam lebar jalur merentas sembilan model. Apabila sesuatu kaedah membaca puncak tampak yang lebar pada panjang gelombang tetap, lebar jalur 4 nm atau 5 nm bukanlah kompromi. Apabila kaedah itu melibatkan puncak tajam, bahu, atau dua puncak yang mesti dipisahkan, model 1.8 nm atau 2 nm ialah model yang dapat melakukannya.

Panjang gelombang tunggal atau pengimbasan

Model asas ditetapkan kepada satu panjang gelombang dan membaca sampel di situ, iaitu apa yang diperlukan oleh penentuan rutin dan cara terpantas untuk menjalankannya. Model N dan NC serta model Pro dan 1800 mengimbas: panjang gelombang bergerak secara berterusan dan spektrum direkodkan merentas sesuatu julat, iaitu apa yang diperlukan untuk mencari puncak, membandingkan sampel dengan spektrum rujukan, atau memastikan tiada apa-apa yang tidak dijangka menyerap di tempat lain dalam julat.

Pengimbasan bukan hanya untuk kerja penyelidikan. Mana-mana kaedah yang mesti disahkan dalam makmal, atau yang mungkin terganggu oleh bahan pengganggu, lebih mudah dipertahankan dengan spektrum daripada dengan satu titik, dan spektrum yang diambil sekali sering menghapuskan pertikaian kemudian. Apabila kaedah ditetapkan pada satu panjang gelombang dan jawapannya hanyalah angka pada panjang gelombang itu, operasi panjang gelombang tunggal bukanlah kekangan dan model pengimbasan tidak diperlukan.

Berkas tunggal dan berkas berganda

Lapan daripada sembilan model ialah berkas tunggal, yang mengukur rujukan dan sampel pada masa yang berbeza dan bergantung pada penyasifan semula untuk mengekalkan keduanya setanding. LC-UV1800 ialah berkas berganda, yang membelah cahaya supaya sampel dan rujukan diukur pada masa yang sama dan apa-apa perubahan yang menjejaskan keduanya dibatalkan secara berterusan. Dalam instrumen berkas tunggal, hanyutan sumber, hanyutan pengesan dan perubahan suhu dalam ruang semuanya masuk ke dalam keputusan antara bacaan rujukan dan bacaan sampel; penyasifan semula berkala menghapuskan sebahagian besarnya, dan itulah sebabnya instrumen berkas tunggal kekal cukup memadai untuk kerja rutin.

Perbezaan itu menjadi wajar dibayar dalam dua keadaan: pengukuran yang mesti dikekalkan stabil sepanjang tempoh yang panjang, dan kaedah yang perbezaan absorbans antara sampel dan rujukan cukup kecil sehingga hanyutan menjadi bahagian yang penting daripadanya. LC-UV1800 juga membawa lebar jalur paling halus dalam julat ini pada 1.8 nm, jadi ia ialah instrumen untuk makmal yang memerlukan lebar jalur sempit dan kestabilan dan bukan yang sekadar mahukan yang teratas dalam senarai.

Kuvet, ruang sampel dan bahan guna habis

Setiap model dibekalkan dengan pemegang kuvet empat kedudukan, sama ada pemegang 1 cm tetap atau pada sesetengah model pemegang boleh laras 0.5-5 cm, dan satu kotak berisi empat kuvet kaca 1 cm. Model UV menambah dua kuvet kuarza. Itulah setnya, dan perkara yang perlu dipegang ialah kaca tidak menyalurkan cahaya dalam ultraviolet: mana-mana pengukuran di bawah kira-kira 320 nm memerlukan sel kuarza, ia hanya datang dengan model UV, dan ia mesti dipesan secara berasingan. Sel kuarza tambahan ialah item pesanan tersendiri dan bukan aksesori yang boleh dipinjam daripada instrumen lain.

Panjang laluan pemegang penting dengan cara yang sama seperti lebar jalur: absorbans berkadar dengan jarak yang dilalui cahaya melalui sampel, jadi pemegang 0.5 cm dan 5 cm mengukur jumlah yang berbeza bagi larutan yang sama. Apabila sesuatu kaedah menyatakan panjang laluan, pemegangnya mesti sepadan, dan apabila sampel cair perlu dibaca tanpa pemekatan, panjang laluan yang lebih panjang menaikkan absorbans ke dalam julat yang berguna.

Had dan kekangan pengukuran serta pertimbangan pemilihan

Beberapa parameter yang penting dalam makmal tidak dinyatakan di mana-mana dalam bahan: bekalan sesalur, masa pemanasan, had suhu dan kelembapan ambien, selang penggantian sumber, perlindungan kemasukan perumah, dan hayat sumber cahaya setiap model. Tiada apa-apa di sini disimpulkan untuk mengisi jurang itu, dan catatan bahan itu sendiri bahawa angkanya ialah nilai nominal pembekal, untuk disahkan terhadap plat nama dan manual yang dihantar, terpakai pada seluruh halaman.

Dua had operasi wajar dinyatakan dengan jelas. Instrumen ini berberat antara 7 kg dan 12.5 kg bergantung pada model dan merupakan instrumen bangku yang laluan optiknya sensitif kepada getaran, jadi ia wajar diletakkan di atas bangku yang stabil dan bukan troli kongsi. Dan lampu ialah bahan guna habis dengan hayat berkadar 1000 h atau 2000 h mengikut model, yang menurut bahan dipendekkan oleh pensuisan kerap, jadi instrumen yang digunakan sepanjang hari bekerja lebih baik dibiarkan berjalan daripada dihidupkan dan dimatikan di sekeliling setiap pengukuran.

Apabila instrumen hendak digunakan untuk pengujian terkawal, dokumen kelayakan ialah keperluan berasingan. Bahan mencatat bahawa bahan pensijilan telah dibuang di sumber dan tiada maklumat sijil disertakan, dan ia menasihatkan permintaan sijil kelulusan jenis dan dokumen pengesahan 3Q daripada pembekal untuk pengujian farmaseutikal dan makanan. Itu ialah persoalan untuk pertanyaan dan bukan andaian daripada penghantaran.

Pesanan

Perkara yang menentukan jawapan ialah panjang gelombang atau panjang gelombang yang digunakan oleh kaedah, lebar puncak dan oleh itu lebar jalur yang diperlukan, sama ada operasi panjang gelombang tunggal mencukupi atau spektrum mesti direkodkan, sama ada julat ultraviolet diperlukan sama sekali, panjang laluan sel, sama ada keputusan mesti ditangkap pada komputer, dan dokumen mana yang diperlukan oleh sistem kualiti makmal. Nyatakan kaedah dan bukan hanya model apabila boleh, kerana panjang gelombang dan lebar puncak itulah yang menetapkan senarai model dan bukan sebaliknya. Kuantiti, pelabuhan destinasi dan tarikh penghantaran yang dikehendaki melengkapkan pertanyaan.